人巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）ELISA

酶联免疫吸附试验

       ①直接法    该方法直接利用抗原 与酶联抗体的结合，较简单易行。A.假抗原。在聚苯乙烯酶标版的孔穴中加入待检测的抗原（捕食者胃内含物抽提液）0.2mL，在4℃冰箱中过一夜，使抗原黏附于塑料孔壁上。B.洗涤两次，倒置于干毛巾上，使孔穴中的液体尽量流出。c.加酶联抗体。 各孔穴中加入酶联抗体0.2mL，在mL37℃下孵育3h，使其充分结合。d. 加底物。 用PBS充分洗涤以除去未结合的酶联抗体，然后加入底物（邻苯二胺）0.2 mL，于37℃反应30min，用2mol/L硫酸0.05 mL终止反应。e. 用ELISA检测仪测定其吸光度值，分别设阳性、阴性和空白对照，以确定阳性反应临界值。

        ②双抗体夹心法   该方法与直接法的不同在于吸附抗体。a. 包被抗体。酶标板的孔穴中加入0.2 mL抗体（用PH=9.6/0.05mol/L碳酸盐缓冲液稀释），置37℃水浴中孵育3h,移入4℃冰箱过一夜。将各孔中多余的抗体倾去，加入PBS洗涤，立即甩去，再将PBS加满各板孔，置5min,甩去溶液，如此洗涤2次，倒置于干毛巾上，使孔穴中的液体尽量流出。b. 加待检抗原。没孔中加入待检捕食者胃内含物抽提液0.2 mL.同时设阳性、阴性和空白（PBS）对照，37℃水溶中孵育3h，转入冰箱中过一夜。如上法洗涤3次。C. 加入酶联抗体。每孔加入酶联抗体0.2 mL，37℃水浴孵育2h，如上法洗涤3次。d. 加底物。 每孔加入底物邻苯二胺0.2 mL, 37℃水浴孵育1h,加入2mol/L硫酸0.05，以终止反应。e. 用 ELISA检测仪测定其吸光度值。

       ③间接法  与前两种方法不同点在于酶联抗体与抗原的间接结合。a. 每孔加入待检抗原0.2 mL ，4℃冰箱中过一夜，使抗原黏附于塑料孔壁上。并依上法洗涤3次。b. 每孔加0.2 mL,用PBS稀释的抗体，37℃孵育2-3h。c.用PBS洗涤3次后，加入溶于PBS的酶联抗体0.2mL，37℃孵育2-3h。d. 加底物，方法同上。e. 用ELISA检测.

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