人肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISA试剂盒实验原理

1． 采用双抗体夹心法测定标本中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISAKit水平。

2. 首先用纯化的人肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISAKit抗体包被微孔板，制成固相抗体。

3. 然后往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISAKit，再与HRP标记的肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISAKit抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成    蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。

4. 颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISAKit呈正相关。

5.  zui后用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算出样品中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISAKit浓度

。

目的：测定人的血清，血浆及相关液体样本中肿瘤坏死因子α（TNF-α）ELISAKit的含量。

6. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。

7. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）去除颗粒。仔细收集上清，如有沉淀，再次离心。

安全性：
1． 避免直接接触终止液和底物。如不小心接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3． 不要用嘴接触试剂盒里的任何成份。

4   Elisa试剂盒请远离儿童

自备物品：

1 、 37 ℃ 恒温箱

2 、 标准规格酶标仪

3 、 精密移液器及一次性吸头

4 、 蒸馏水

5 、 一次性试管

6 、 吸水纸

保存条件及有效期：

1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月

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