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人巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)ELISA Kit实验原理
点击次数:1858 更新时间:2010-09-07

人巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)ELISA Kit实验原理

 

 

本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定人的血清,血浆及相关液体样本中巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)的含量。

实验原理:

   本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)水平。用纯化的人巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)再与HRP标记的巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)浓度。

 

样本处理及要求

 

1.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8的温度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

2.尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

3.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBSPH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5.血浆:应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

注意事项:

a .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

B . 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

C .各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

D .请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。

E .封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

如有需要请索要说明书:www.021yjsw.com

 

沪公网安备 31011802001678号

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