ELISA原理酶联免疫吸附测定

1.ELISA原理和类型

抗体或抗原可以吸附在合适的载体上，酶标记抗体或抗原相应的抗原或抗体形成酶标记的抗原抗体免疫复合物，在一定的底物参与下，复合物上的酶催化底物使其水解，氧化或还原成为另一种带色物质。由于在一定的条件下，酶的降解底物和呈现色泽是成正比的，因此可以应用分光光度计进行测定，从而计算出参与反应的抗原和抗体的含量。这就是Peter Perlmann 和Eva Engvall所建立的ELISA技术的原理。

按照所用固相载体的不同，ELISA又分为普通ELISA和Dot-ELISA.

招照抗体或抗原在固相载体上不同的吸附方法，又根据使用不同的抗体例如能与抗原直接反应的抗体（通常称为一抗），能与一抗起免疫结合反应的标有酶的抗体（通常称为酶标二抗），ELISA分化出多项不同的测定方法。

ELISA一般分为下述几种类型：

• 直接法：首先将抗原吸附于载体表面，然后将酶标记抗体与该抗原反应结合，形成酶标记的免疫复合物，zui后加入底物产生有色物质，进行光密度测定，算出抗原存在量。
• 间接法：首先将抗原吸附于载体表面，然后加抗血清，使特异性抗体（*抗体）与抗原结合，再加酶标记抗球蛋白（第二抗体，即抗*抗体的抗体），与*抗体结合，形成酶标记的免疫复合物，zui后加入底物产生有色物质，进行光密度测定，算出抗体存在量。
• 双重抗体法：首先将抗体吸附于载体表面，形成抗体球蛋白致敏载体表面，然后加抗原溶液，使抗原与抗体结合，再加入酶标记的抗体球蛋白，与被致敏载体表面吸附的抗原结合，形成酶标记的免疫复合物，zui后加入底物产生有色物质，进行光密度测定，算出抗原存在量。ELISA双重抗体法也称ELISA双重抗体夹心法，该法能减弱非特异颜色的干扰，并且在测定时可不做空白对照。
• 酶标记抗原竞争法：首先将抗体吸附于载体表面，形成抗体球蛋白的致敏载体表面，然后加入以不同比例混合的抗原和酶标记的抗原溶液，与吸附在载体上的抗体发生免疫反应，形成酶标记抗原与抗体的免疫复合物和非标记抗原与抗体的免疫复合物，zui后加入底物，通过酶的底物水解量(测定光密度而知)来确定未知溶液有无抗原及抗原量多少。

酶标记抗原竞争法利用混合的未标记抗原和酶标记抗原相互竞争抗体上的结合点，从而进行抗原的定量。未标记抗原的量越大，则酶标记抗原和抗体的结合就越受到抑制。但是竞争法在实验时比较复杂，有时在抗原混合液与相应抗体孵育后，在测定游离抗原与抗体相结合抗原的活性以前，要先进行盐析或有机溶剂沉淀或第二抗体沉淀等方法把两种不同存在形态的抗原分开。并且在加入底物后，容易产生血清色的物质。因此，每次测定时都需做空白对照。由于这些缺点，酶标记抗原竞争法使用不多。

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