夹心法测抗原方法和包被条件

在夹心ELISA法中可用棋盘滴定法同时选择包被抗体和酶标抗体的工作浓度， 1：抗体免疫球蛋白用包被缓冲液稀释至蛋白浓度为10UG/ML"0.1UG/ML,FB分别在ELISABAN板上进行包被，每一浓度包被三个纵行，洗。

2在一个横行各包被孔中加入强阳性抗原液，另一横行加入弱阳性抗原液，第三横行加入阴性对照液，腐育，洗条。

3将酶标抗体用稀释液稀释成三个浓度

分别加入每一包被浓度的一个纵行中，孵育，洗涤。

4加底物显色，加酸终止反应后，读取A值。

5以强阳性抗原液的A值在0.8左右，阴性参考液的A值小于0.1的条件作为zui适条件，据此选择包被抗体和酶标抗体的工作浓度。包被缓冲液的PH和离子强度对吸附也有影响。包被蛋白质的缓冲溶液的PH宜片5碱性，在PH=7~10都可以达到较好的吸附效果，如常用的缓冲溶液有碳酸盐缓冲溶液（PH=9.6）·                           

 缓冲液还影响某些方法的敏感性，在用类脂和病毒抗原包被时，有必要加入脱氧胆酸钠，将包被的抗体F 段部分变性可以增加敏感性。

有些单克隆抗体很难吸附固相，需要试用不同的缓冲液及缓冲液的浓度与PH，另外，还要注意包被的条件和包被抗原与抗体的浓度。