布鲁氏菌病抗体检测试剂盒

使用说明书

（酶联免疫法）

【产品名称】

通用名：布鲁氏菌病抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Brucella（ELISA）

【包装规格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【预期用途】

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌（Brucella）引起的人、畜共患传染病，其特征是生殖器官和胎膜炎，引起流产、不育和各种组织的局部病灶。

本试剂用于检测牛、羊血清中布鲁氏杆菌抗体，可用于布鲁氏菌疫苗免疫效果评价或该病的辅助诊断。

【原    理】

本试剂盒由预包被布鲁氏菌抗原的酶标板、酶标记物、抗体工作液及其他配套试剂组成，应用竞争酶联免疫法（ELISA）原理检测牛羊血清、血浆样本中布鲁氏菌抗体。实验时在酶标板中加入待检样本及酶标记物、抗体工作液，经温育后若样品中含有布鲁氏菌抗体，则将与抗体工作液竞争结合酶标板上抗原，酶标记物与抗体工作液及酶标板上抗原形成复合结合物；再经洗涤除去未结合的其他成分，在孔中加TMB底物液，若样品中含有布鲁氏菌抗体则将阻断酶标记物、抗体工作液与酶标板上抗原结合，从而使后续反应不出现显色；反之则出现显色；显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关；加入终止

液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有布鲁氏菌抗体。

【试剂盒组成】

【适用仪器】

含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

【样品准备】

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2. 浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作 20 倍稀释成工作洗涤液 ( 如 19 份蒸馏水或去离子水 +1 份浓缩洗涤液 )。

3. 用工作洗涤液将待检血清先按 10 倍稀释（如 10μl 血清加入90μl 工作洗涤液中，混匀），待检血清按 25 倍稀释（如 4μl 血清加入 96μl 工作洗涤液中，混匀），阴、阳性对照不用稀释。

【检验方法】

1.使用前将试剂盒置室温30min，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3. 阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照 50μl；样品孔每孔

先加入稀释后的血清样品 50μl。

然后每孔依次加入 50μl 酶标记物、50ul 抗体工作液。

4. 混匀，盖好盖板膜，置 37℃（推荐水浴）避光反应 45 分钟。

5. 甩去孔内液体，每孔加 350μl 工作洗涤液，静置 30 秒后弃去，重复洗涤 5 次，最后一次拍干。

6. 每孔依次加底物液 A、底物液 B 各 50μl，混匀，盖好盖板膜，置 37℃避光反应 15 分钟。

7. 每孔加终止液 50μl，混匀，于 450nm( 可用 630nm 作参比

波长）测定各孔吸光值（A 值）。

【参考值】

实验正常的情况下，阴性对照吸光值≥1.0，阳性对照吸光值≤阴性对照吸光值 ×50%。

【检验结果的判定】

1.PI（阻断率）=（1-样本A值/阴性对照平均A值 ）×100%，

PI≥50% 为阳性；PI＜50% 为阴性。

2.本实验结果为阴性或可疑时表明猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。

【试验方法的局限性】

本检测结果仅供筛查，不作为确诊依据。

【注意事项】

1、试剂盒各组份从冷藏环境中取出时，必须平衡至室温后，方可开封启用。未使用完的试剂组份应及时放回 2~8℃密封保存。

2、试剂盒请在有效期内使用，拆开的试剂盒尽量在 2 个月内用完，以免拆开后保存不当失效。

3、试剂盒在使用过程中，不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

4、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会导致洗板不彻底，出现阴性对照不成立等异常情况，所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

5、试剂盒中终止液具有腐蚀性，避免接触皮肤。

6、本方法仅为筛选方法，不能作为确诊依据。

7、试验过程遇到任何问题，请与厂商联系。

【储存及有效期】

于2～8℃避光保存，有效期为12个月。

包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

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