Taq DNA Polymerase说明书
货号：K0680
保存条件：-20℃保存。
组分说明
Cat. No. K0680 K0680E K0680F
Kit Size 500 U 6×500 U 5×2000 U
Taq DNA Polymerase, 5 U/μl 100 μl 6×100 μl 5×400 μl
10×Taq PCR Buffer with Mg2+ 2×1 ml 3×5 ml 8×5 ml
注意：本产品的10×Taq PCR Buffer中含有15 mM镁离子。
产品简介
Taq DNA Polymerase是通过大肠杆菌表达纯化的重组酶。其基因来源于Thermus
aquaticus polymerase。该蛋白分子量为94 kDa，具有5′→3′ DNA聚合酶活性和5′→3′外切核酸酶活性，无3′→5′外切核酸酶活性，扩增得到的PCR产物3′端附有一个“A"碱基，因此可直接用于 T/A克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高的特点，主要适用于PCR法扩增DNA片段、DNA序列测定等实验。
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧
核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位（U）。
质量控制
经过多次柱纯化， SDS-PAGE检测其纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性；
PCR方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一
个月，无明显活性改变。
本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途
使用方法
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的
片段大小不同进行相应的改进和优化。
1. PCR反应体系
试剂 50 μl体系 终浓度
10×Taq PCR Buffer with Mg2+ 5 μl 1×
dNTP Mix，2.5 mM each 4 μl 200 μM each
Forward Primer，10 μM 2 μl 0.4 μM
Reverse Primer，10 μM 2 μl 0.4 μM
Template DNA <1 μg <1 μg/reaction
Taq DNA Polymerase，5 U/μl 0.25 μl
RNase-Free Water up to 50 μl
注意：1）引物浓度请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2）镁离子浓度请以终浓度1.5-3 mM作为设定范围的参考。本产品的10×PCR Buffer中已经含有15 mM镁离子，可根据不同的引物对和模板来调节镁离子浓度，由此优化反应体系。
2. PCR反应条件
步骤 温度 时间
预变性 94℃ 2 min
变性 94℃ 30 s
退火 55-65℃ 30 s 25-35个循环
延伸 72℃ 30 s
终延伸 72℃ 2 min
注意：1）一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2）延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品Taq DNA Polymerase的扩增效率为1 kb/30 s。
3）可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
3.结果检测：反应结束后取5 µl反应产物，加入适量上样缓冲液后，进行琼脂糖凝胶电
泳检测。
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