2×GC-rich PCR MasterMix（无染料）说明书
货号：K0658
保存条件：-20℃长期保存。如需频繁使用，可存放于2-8℃，尽量避免反复冻融。
组分说明
Cat. No. K0658
Kit Size 1 ml
2×GC-rich PCR MasterMix（无染料） 1 ml
RNase-Free Water 1 ml
注意：2×GC-rich PCR MasterMix含有Es Taq DNA Polymerase,
2×Es Taq PCR Buffer, 3 mM MgCl2和400 µM dNTP mix。
产品简介
本品是由Es Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg、dNTPs以及PCR稳定剂
和增强剂组成的预混体系，浓度为 2×。预配好的PCR混合液使操作更加2+ 简单快捷，可最大限度地减少人为误差和污染。经过优化的缓冲液配方使酶的作用发挥最大功效，实现对复杂模板的高保真、高效率扩增，d创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，重复性好。本品不含染料， PCR程序结束后可根据需要加入适量上样缓冲液后进行电泳操作。扩增得到的PCR产物3′端附有一个“A"碱基，因此可直接用于T/A克隆。主要适用于对保真性要求较高的PCR反应和结构复杂的模板如GC含量高，有二级结构等的扩增，对简单模板有效扩增的片段可达20 kb，对复杂模板可达10 kb。
质量控制
经检验无外源核酸酶活性； PCR方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增多种基
因组中的单拷贝基因；2-8℃存放三个月，活性无明显改变。
本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途
使用方法
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的
片段大小不同进行相应的改进和优化。
1. PCR反应体系
试剂 50 μl反应体系 终浓度
2×GC-rich PCR MasterMix 25 μl 1×
Forward Primer，10 µM 2 μl 0.4 μM
Reverse Primer，10 µM 2 μl 0.4 μM
Template DNA 2 μl <1 μg/reaction
RNase-Free Water up to 50 μl
注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2. PCR反应条件
步骤 温度 时间
预变性 94℃ 2 min
变性 94℃ 30 s
退火 55-65℃ 30 s 25-35个循环
延伸 72℃ 30 s
终延伸 72℃ 2 min
注意：1）一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2）延伸时间应根据所扩增片段大小设定，Es Taq DNA Polymerase的扩增效率为1 kb/30 s。
3）可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
3.结果检测：本产品不含染料，反应结束后取5 µl反应产物加入适量上样缓冲液后进行电泳检测结果。
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