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试剂盒实验步骤可从以下四个步骤进行
点击次数:782 更新时间:2021-11-20
  ELISA试剂盒以灵敏度较高、特异性较好的特点在上得到了广泛的应用,那么这种试剂盒该如何使用呢?请看这里。
  一、重要的洗涤:
  不充分的洗涤会导致差异和高背景,从而带来不理想的实验结果。如果未结合的材料残留在微孔板中,那么它会增加背景噪音。有必要的话,可增加洗涤液中的盐浓度,这会阻止非特异结合反应。如果背景过高,怀疑洗涤不够时,可以尝试增加洗涤次数。
  第二、关键的封闭:
  封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的机会。如果背景过高,怀疑封闭不充分,那么可以尝试使用更高浓度的封闭液,或适当延长封闭时间。
  目前主要有两种类型的封闭液:蛋白和非离子型去污剂。使用的类型须取决于多个因素,包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、抗体和检测试剂。好的封闭液应降低非特异性结合,但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。
  第三、抗体浓度须优化:
  如果试剂稍有不同,则可能需要优化抗体的量。非特异的抗体结合会增加背景。为了防止这一点,切勿使用过多的一抗或二抗。
  第四、检测试剂要适量:
  切勿使用过多的检测试剂。如果浓度过高,或者未正确稀释,则会导致高背景。也不要显色过度,如有必要,优化一下何时应加入终止液。
  只有确保每一步操作都做到位,才会呈现理想的实验结果。所以ELISA实验的每一步都很重要,我们在实验的时候切记不可以掉以轻心。

沪公网安备 31011802001678号

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