鼠Streptavidin-HRP试剂盒（带DAB显色液）说明书
SPMouseHRPKit（DAB）
鼠Streptavidin-HRP试剂盒（带DAB显色液）
Cat.No.K2068
保存：2-8℃
组分说明
Cat.No. K2068 K2068A
KitSize 3ml 18ml
内源性过氧化物酶封闭液（试剂1，白色液体） 3ml 18ml
封闭用正常羊血清工作液（试剂2，白色液体） 3ml 18ml
生物素标记羊抗鼠二抗工作液（试剂3，黄色液体） 3ml 18ml
HRP标记的链霉亲和素（试剂4，红色液体） 3ml 18ml
DAB-A液（20×） 250μl 1ml
DAB-B液（1×） 5ml 20ml
*本试剂盒仅适用于一抗为鼠源抗体的IHC实验
产品简介
本试剂盒根据生物素（Biotin）与链霉亲和素（Streptavidin）具有强亲和力的原理设计。在鼠源的一抗与相应的靶抗原结合后，本试剂盒中的生物素标记羊抗鼠二抗与一抗特异结合；二抗上标记的生物素与标记过氧化物酶（HRP）的链霉亲和素结合，形成抗原～特异性一抗～生物素化的二抗～HRP标记的链霉亲和素复合物。HRP可以催化底物显色，从而推断待检抗原的存在及分布。该试剂盒使用的生物素化二抗、SA-HRP，均采用优化的标记和纯化技术，使得其染色有更高灵敏度和更低的背景，适合于检测福尔马林固定石蜡包埋组织切片，以及冰冻切片、细胞爬片、新鲜制备的血涂片等。鼠Strept-avidin-HRP试剂盒适合与上海研谨生物即用型或浓缩型抗体配套使用。
注意事项
1. 以每张切片加入1滴（约50μl）计算，3ml可做60张切片，18ml可做360张切片。
2. 对于内源性生物素含量比较丰富的组织，使用本试剂盒时最好用内源性生物素阻断剂进行封闭。
3. DAB工作液现配现用，配制好的工作液2-8°C避光1小时内有效。
实4.验过程中避免组织片干燥，因此各步孵育时工作液用量必需充足，保证*覆盖组织样本，且尽量在湿盒中进行孵育。
为5.获得最佳实验结果，请务必优化实验条件及试剂用量。
6. DAB为可疑致癌物，使用时请采取必要的防护措施。
7. 本产品仅用于科研，不能用于人体反应或人体治疗。
使用方法
1. 常规处理欲检测的石蜡或冰冻组织切片或细胞爬片等样本。
1）组织切片或细胞爬片染色前处理：
a.石蜡切片
脱蜡水化：60ºC烤片1小时，二甲苯脱蜡二次，每次5分钟；再依次浸入梯度乙醇（无水乙醇－无水乙醇－95% －85%－75%乙醇）和蒸馏水中各5分钟水化。
b.冰冻切片和细胞爬片
切片（或爬片）浸于0.01MpH7.4PBS洗涤3次×5分钟。然后用0.1%TritonX-100覆盖组织（或细胞）浸润15分钟，0.01MpH7.4PBS洗涤2次×5分钟。
2）石蜡切片的抗原修复：绝大大多数情况下，石蜡组织切片用柠檬酸缓冲液高压修复都是适合的。
修复工作液配制：1L去离子水中加入10ml柠檬酸缓冲液（IHC抗原修复液,100×)（Cat#：K0128），混匀即可。
修复过程：修复液加入高压锅内，待修复切片浸于修复液中（必需没过组织），盖上压力锅盖，加热至均匀喷汽，从喷汽开始计时，1~2分钟后压力锅离开热源，自然冷却至室温，取出切片，蒸馏水淋洗后，再用PBS（0.01MpH7.4）漂洗2次，每次3分钟。
2.滴加适量试剂1（内源性过氧化物酶封闭液），室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
3.滴加适量试剂2（封闭用正常羊血清工作液），室温孵育10分钟，甩干。
4.滴加适量一抗工作液（商品化即用型抗体或适当比例稀释的浓缩抗体），按实验要求孵育，然后PBS充分淋洗。
5.滴加适量试剂3（生物素标记羊抗鼠二抗工作液），室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
6.滴加适量试剂4（HRP标记的链霉亲和素），室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
7.DAB显色工作液配制：根据需要量，将试剂A和试剂B以1：19的体积比混匀后即为DAB显色工作液。也可选择每 毫升试剂B中滴加1滴（约50μl）试剂A，混匀即可。
8.显色：加适量的DAB显色工作液于需要显色的组织切片或细胞爬片上即可显色，显色时间一般为1~5分钟。显微镜下观察控制显色时间，当达到最佳显色效果后，自来水冲洗终止显色。显色后的切片经复染、脱水透明，封片后可长期保
存。
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