博来霉素(Bleomycin)与铁的复合物嵌入DNA,引起DNA单链和双链断裂。不引起RNA链断裂。作用的第一步是本品的二噻唑环嵌入DNA的G-C碱基对之间,同时末端三肽氨基酸的正电荷和DNA磷酸基作用,使其解链。作用的第二步是本品与铁的复合物导致超氧或羟自由基的生成,引起DNA链断裂。口服无效,需经肌内或静脉注射。
博莱霉素应用领域:
可选择Sh ble基因表达的细胞。与现在使用的其他动物细胞标记物无交叉抗性
因此这种抗生素可用来分离对其他筛选剂(如:庆大霉素,潮霉素)有抗性的克隆。Zeocin是一种属于争光霉素家族的糖蛋白抗生素,在体内能作用于大多数细菌(包括E. coli)、真菌(如:酵母菌)、植物细胞、动物细胞。
博莱霉素溶液的配制方法:
1. 先将使用到的所有器具高温灭菌,仪器表面、工作台面消毒。
2. 在分析天平上称取博莱霉素粉末0.500 g,加10 mL无菌水溶液溶解。
3. 用0.2微米滤膜过滤除菌到无菌容器中,然后分装到 1.5 mL EP管中。
不建议使用螺旋盖管子,容易污染。-20度保存。
为避免污染和反复冻融,建议分装成小规格的,如500 uL。
博莱霉素使用办法:
1、液体Zeocin可用于细胞培养。
2、用于筛选转化株的Zeocin浓度根据PH值和盐浓度改变。
3、PH越高,盐浓度越低Zeocin活性越大。
4、普通大肠杆菌菌株筛选可在25 ?g/ml zeocin浓度的低盐LB琼脂培养基中进行,PH调至7.5 。
5、动物细胞筛选:根据不同细胞系从100 到 750 ?g/ml 。
6、植物细胞筛选:根据不同的细胞种类和培养基从50 到 250 ?g/ml 。