EASYspin组织/细胞RNA快速提取试剂盒

EASYspin RNA Rapid Tissue and cell Kit

 保存条件：本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

产品介绍：

*的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞 RNA 酶，然后用乙醇调节

结合条件后,RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过

一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂

质去除，后低盐的 RNase free H₂0 将纯净 RNA 从硅基质膜上洗脱。

自备试剂：乙醇, β-巯基乙醇

注意事项：

1.需要自备一次性注射器，研钵。RA105 EASYspin  组织 细胞RNA快速提取试剂

盒-MBI2.裂解液RLT 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手

套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生

理盐水冲洗。

3.关于DNA 的微量残留：

一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法*避免DNA 的微量残留,

本公司的EASYspin 系列RNA 提取产品，在大多数 RT-PCR 扩增过程中极其

微量的DNA 残留（一般电泳 EB 染色紫外灯下观察不可见）影响不是很大,

如果要进行严格的mRNA 表达量分析如荧光定量 PCR,我们建议在进行模板

和引物的选择时：

•  
• 选用跨内含子的引物,以穿过 mRNA 中的连接区,这样 DNA 就不能作
•  
• 为模板参与扩增反应。
•  
• 选择基因组DNA 和 cDNA 上扩增的产物大小不一样的
•  
• 引物对。
•  
• 操作步骤：

提示：

ð 第--次使用前请先在漂洗液 RW 瓶和 70%乙醇瓶中加入指+*定量无水乙醇!

ð 操作前在裂解液RLT 中加入β-巯基乙醇至终浓度 1%，如 1 ml RLT  中加入

10μl β-巯基乙醇。此裂解液+*好现用现配。配好的 RLT 4℃可放置一个月

1.组织培养细胞

a. 收集<107 悬浮细胞到一个 1.5ml 离心管，对于贴壁细胞，孔板培养可以直接

裂解， 细胞瓶培养应该先用胰蛋白酶消化后吹打下来收集。

b. 2,000rpm 离心 10 sec（或者 300g 离心 5 min），使细胞沉淀下来。*吸弃

上清，留下细胞团，注意不*弃上清会稀释裂解液导致产量纯度降低。

c. 轻弹管壁将细胞沉淀*松散重悬， 加入 350μl（<5x106 细胞） 或者

600μl（5x106-1x107  细胞）裂解液RLT，吹打混匀后用手剧烈振荡 20 sec，充分裂解。

d.用带钝针头的一次性 1ml(配 0.9mm 针头) 注射器抽打裂解物 5-10 次或直到

得到满意匀浆结果(或者电动匀浆 30 sec),可以剪切 DNA,降低粘稠度和提高产

量。

e.接操作步骤项下 3。

2. 动物组织（例如鼠肝脑）

a. 电动匀浆：新鲜组织用解剖刀迅速切成小碎块, 加入 350μl(<20mg 组织) 或

者600μl(20-30mg 组织)的裂解液RLT 后电动*匀浆 20-40 sec。

b. 液氮研磨+匀浆：在液氮中研磨组织成细粉后，取适量组织细粉

(20mg/30mg)转入 装有 350μl/600μl 组织裂解液 RLT 的 1.5ml 离心管中,  用手剧

烈振荡 20 sec，充分裂解。用带钝针头的一次性 1 ml(配 0.9mm 针头)  注射器

抽打裂解物 10  次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30 sec),可以剪切

DNA,降低粘稠度和提高产量。

c. 将匀浆后裂解物 12,000rpm 离心 3 min,沉淀可能存在的裂解困难的碎片或者不

溶物,将裂解物上清小心转到一个新离心管。