质粒小量快速提取试剂盒

Rapid Mini Plasmid Kit

产品信息：

保存条件：本试剂盒在室温储存 18 个月不影响使用效果。

产品介绍：

本试剂盒采用改进 SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高

盐、低pH 值状态下选择性地结合溶液中的质粒 DNA，再通过漂洗液将杂质和

其它细菌成分去除，后低盐、高 pH 值的洗脱缓冲液将纯净质粒 DNA 从硅

基质膜上洗脱。

产品特点：：

1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极

小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

• 快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯+#仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。获得的质粒产量高、纯度好， 可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。

注意事项：

• 第--次使用时，将试剂盒所带的全部 RNase A 加入溶液 P1 后（终浓度 100ug/ml） 于 2-8℃保存。如果溶液 P1 中 RNase A 失活，提取的质粒可能会有微量 RNA 残留， 在溶液 P1 中补加 RNase A 即可。
• 环境温度低时溶液 P2 中 SDS 可能会析出浑浊或者沉淀，可在 37℃水浴加热几分钟， 即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
• 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化。
• 本试剂盒适用菌株为 XL-1 Blue 和 DH5a 等核酸酶含量低缺陷型菌株。所用菌株为JM 系列、HB101 等 endA 菌株或野生型菌株，核酸酶含量丰富，应购买本公司生产的高纯度质粒小量快速提取试剂盒。
• 溶液 P3 中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。一般高拷贝质粒，建议接种单菌落于 1.5-4.5ml 加合适抗生素的 LB 培养基，过夜培养 14-16 个小时，可提取出多达 20µg 的纯净质粒。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10kb 的大质粒，应适当加大菌体使用量，使用 5-10ml 过夜培养物，同时按比例增加 P1、P2、P3 的用量，其它步骤相同。
• 得到的质粒 DNA 可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD₂₆₀ 值为 1 相当于大约 50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带，也可能为 2 条或者多条 DNA 条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过 90%。

7. 洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使

用水洗脱， 但应该确保 pH 大于 7.5，pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒

应该保存在-20℃。质粒DNA 如果需要长期保存，可以用 TE 缓冲液洗脱

（10mM Tris-HCl，1mM EDTA， pH 8.0），但是 EDTA 可能影响下游酶切反应，

使用时可以适当稀释。

自备试剂：无水乙醇

操作步骤：

提示：

ð 第--次使用前请先在漂洗液 WB 中加入指+#定量无水乙醇，充分混匀，加入

后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

ð 将 RNase A 全部加入溶液 P1 中，混匀，每次使用后置于 2-8℃保存。