全血/组织/细胞基因组DNA快速提取试剂盒
Rapid Genomic DNA Kit
产品信息：
试剂盒组成 | 保存 | YDL110-01 100 次 | YDL110-02 200 次 |
RNaseA（10mg/ml） | 室温 | 300μl×2 | 300μl×4 |
裂解液 TL | 室温 | 25ml | 50ml |
缓冲液 BB | 室温 | 50ml | 100ml |
结合液 CB | 室温 | 30ml | 60ml |
抑制物去除液 IR | 室温 | 50ml | 100ml |
|
| 25ml | 25ml×2 |
漂洗液 WB 室温 第-次使用前按说明加指*#定量乙醇 | |||
洗脱缓冲液 EB | 室温 | 15ml | 15ml ×2 |
蛋白酶 K（20mg/ml） | -20℃ | 1ml×2 | 1ml×4 |
吸附柱 AC | 室温 | 100 个 | 200 个 |
收集管（2ml） | 室温 | 100 个 | 200 个 |
保存条件：本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。RnaseA、蛋白酶 K
可室温运输，建议-20℃长期保存。
产品介绍：
*的结合液/蛋白酶 K 迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤， 抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除， 后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱。
产品特点：
1.重复性好:离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2 提取纯度高，OD260/OD280 典型的比值达 1.7～1.9，可直接用于 PCR，Southern-blot和各种酶切反应。
3. 简单快速，一小时内即可获得超纯的基因组 DNA
4. 广 泛：适用于血液、多种动物细胞和动物组织等。
注意事项：
1. 结合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低温时可能出现析出和沉淀，可以在 37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化。
3. 结合液 CB 和抑制物去除液IR 中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 洗脱液 EB 不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该确保批pH 大于7.5，pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA 应该保存在-20℃。DNA 如果需要长期保存，可以用 TE 缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA， pH 8.0），但是 EDTA 可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
自备试剂：无水乙醇
操作步骤：
提示：第-次使用前请先在漂洗液 WB 中加入指#*定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
1. 处理材料
a. 血液
如提取材料为血液，可直接使用220μl新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，不足
220µl用缓冲液BB补足220µl，振荡混匀。
注意：如需处理更大体积血液，如300μl-1ml，应按以下步骤操作：在样品中加入 3 倍体积红细胞裂解液 （例如，300μl血液加入900μl红细胞裂解液），颠倒混匀， 室温放置5 min，期间再颠倒混匀几次。10000rpm离心1 min（若离心 机*#高转速不允许，也可3000rpm离心5 min，吸去上清，留下白细胞沉 淀，加220μl缓冲液BB， 振荡至*混匀。 红细胞裂解液本公司另外有售，可根据需要来决定购买。
b. 
如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量 5-20μl，可加缓冲液 BB 补足 220μl 后进行下面的裂解步骤。
c. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液，然后 10,000rpm 离心 1 min，弃上清，加 220μl
缓冲液BB，振荡至*悬浮；
d. 动物组织（脾组织用量应少 10mg）应先打碎处理为细胞悬液，然后 10,000rpm
离心 1 min，倒尽上清，加 220μl 缓冲液 BB，振荡至*悬浮。
2. 提取组织培养细胞和动物组织DNA时为清除RNA，加入5µl RNase A（10mg/ml），振荡混匀，室温放置5 min。
3. 加入20µl蛋白酶K，振荡混匀，置于55℃水浴中消化处理。
a. 提取血液基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。
b. 提取细胞基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。
c. 提取组织基因组时，加入Proteinase K混匀后，在56℃放置，直至组织溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。
注意：不同组织裂解时间不同，通常需1-3 h即可完成（鼠尾需要消化过夜）。不会影响 后续操作。每小时颠倒混合样品2-3次，用水浴振荡器也可
- 加入结合液CB并充分混匀后，置于70℃水浴10 min，等溶液变清亮，12,000rpm短离心以去 除管盖内壁的水珠。
注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不*，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 不纯。当血液体积≤200μl且没有采用红细胞裂解处理，或是样本储存条件不佳，水浴后颜 色可能为深褐色，注意溶液中没有团块等沉淀
- 加入220µl的无水乙醇，充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去 除管盖内壁的水珠。
- 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中），
12,000rpm 离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱AC放回收集管中。
- 加入500µl抑制物去除剂IR，12,000rpm离心1 min。倒掉收集管中的滤液。并将离心柱放回收集管中。
- 加入500µl 漂洗液WB，12,000rpm离心30 sec。（使用前请检查是否已经加入无水乙醇）倒掉收集管中的滤液。并将离心柱放回
收集管中。
10. 重复步骤9的操作。
11. 将吸附柱AC柱放回收集管中，12,000rpm离心2 min，倒掉废液。将AC吸附置于室温放置数分钟，以*晾干吸附材料中残
余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
- 在吸附膜的中间部位加 500-100μl 洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在 65℃水浴中预热效果更好），室温放置 2-5 min，12,000 rpm 离心 1 min。为了提高基因组 DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱中，室温放置 2-5 min，12,000rpm 离心 1 min。
(注意: DNA 产物应保存在-20℃，以防DNA 降解)
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