GoldStar Best DNA Polymerase说明书
(5×GoldStar Best PCR Buffer With Mg )2+
目录号：K0654
保存条件：-20℃保存。
组分说明
Cat. No. K0654 K0654A K0654C
Kit Size 250 U 500 U 6×500 U
GoldStar Best DNA Polymerase, 5 U/μl 50 μl 100 μl 6×100 μl
5×GoldStar Best PCR Buffer 1 ml 2×1 ml 3×5 ml
注意：本产品的5×GoldStar Best PCR Buffer中含有7.5mM镁离子。
产品简介
该产品是经过特殊处理的热启动高保真聚合酶。该聚合酶具有 5′-3′DNA聚合酶活
性，5′-3′核酸外切酶活性和3′-5′核酸外切酶活性，在普通PCR条件下，与GoldStar Taq
DNA Polymerase相比，具有扩增效率高、错配率低的优良性能。化学修饰使该酶在常
温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚
体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在 95℃下孵育10分钟，该条件可以整合入已有
的PCR热循环程序。优化的缓冲体系使酶的作用发挥大功效，实现对目的片段的高
保真、高特异性、高扩增效率、高灵敏度扩增。使用本制品扩增得到的 PCR产物的3′
端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。本产品应用于常规的PCR、RT-PCR和
多重PCR，特别适用于对特异性、保真性和扩增效率均有较高要求的PCR。
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱
氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位（U）。
质量控制
经过多次柱纯化， SDS-PAGE检测其纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性；
PCR方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一
个月，无明显活性改变。
本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途
使用方法
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的
片段大小不同进行相应的改进和优化。
1. PCR反应体系
试剂 50 μl反应体系 终浓度
5×GoldStar Best Taq PCR Buffer 10 μl 1×
dNTP Mix，2.5 mM each 4 μl 200 μM each
Forward Primer，10 μM 2 μl 0.4 μM
Reverse Primer，10 μM 2 μl 0.4 μM
Template DNA <1 μg <1 μg/reaction
GoldStar Best Taq DNA Polymerase，5 U/μl 0.5 μl
RNase-Free Water up to 50 μl
注意：1）引物浓度请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提
高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2）镁离子浓度请以终浓度1.5-3 mM作为设定范围的参考。本产品的5×GoldStar Best Taq PCR
Buffer中已含有7.5 mM镁离子，可根据不同引物对和模板调节镁离子浓度，由此优化反应体系。
2. PCR反应条件
步骤 温度 时间
预变性 95℃ 10 min
变性 94℃ 30 s
退火 55-65℃ 30 s 30-40个循环
延伸 72℃ 60 s
终延伸 72℃ 5 min
注意：1）一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2）延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品中所包含的GoldStar Best DNA Polymerase的扩增效率为1 kb/min。
3）可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
4）本产品须在预变性95℃，10 min条件下实现酶的活化。
3.结果检测：反应结束后取5 µl反应产物，加入适量上样缓冲液后进行琼脂糖凝胶电泳检测。
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