BCA蛋白定量试剂盒说明书
BCA Protein Assay Kit
BCA蛋白定量试剂盒
目录号：K0014
保存条件：BSA标准品2-8℃保存，其它组分室温保存。
组分说明
Cat. No. K0014
Kit Size 500 次/微孔，50 次/试管
试剂 A 100 ml
试剂 B 3 ml
BSA 标准品 （2mg/ml） 2 ml
本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途
产品简介
BCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本产品是基于 BCA（Bicin
-choninic Acid）法研制而成，实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其
原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+络合生成络合物，同时将Cu2+还
处原成有高的光吸收Cu+。BCA试剂值，可敏感特异地与颜色的深浅与蛋白Cu结质浓合，形成度成正比，可根据吸收稳定的有颜色的复值合物。在的大小来562测 定蛋nm
白质的含量。本试剂盒含有牛血清白蛋白（ BSA）溶液作为蛋白质标准品溶液，测定
范围为20～2000 μg/ml。
注意事项
1．本产品可以采用分光光度计（试管检测法）或者酶标仪（微孔检测法）测定蛋白浓度。
2．建议每次测定蛋白样品时，绘制标准曲线，以获得准确数据。
3．BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致（可用1×PBS或0.9%生理盐水进行
稀释）。
4．完成37℃孵育30分钟或室温孵育2小时后，须在3-5分钟内完成检测，否则会影响蛋
白定量的准确度。
5．如待测样品中含较多的干扰物质（具体见附表1），可采用Bradford法蛋白定量试剂
盒（K0013）或其他蛋白定量产品。
操作步骤
1．稀释BSA标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。
管号 稀释液用量（μl） BSA标准品用量（μl） BSA标准品终浓度（μg/μl）
A 0 100 2
B 200 200 1
C 200 200（从B管中取） 0.5
D 200 200（从C管中取） 0.25
E 200 200（从D管中取） 0.125
F 200 200（从E管中取） 0.0625
G 200 0 0（空白）
2．配置BCA工作液：
1）计算BCA工作液总量：
BCA工作液总量=（BSA标准品样本个数+未知样本个数）×复孔数×每个样本BCA工作液体积
举例：BSA标准品样本个数为7个，未知样本个数2个，复孔数3个。
试管检测法：
BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×2 ml/每个样本工作液体积=54 ml
微孔检测法：
BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×200 μl/每个样本工作液体积=5.4ml
2）根据计算出的BCA工作液需要总量，将试剂A和试剂B按照50：1的体积比，配制
BCA工作液，充分混匀。
注意：1）由于加样可能存在误差，建议配制BCA工作液时，多配制1-2个孔。
2）新配制的BCA工作液室温密封条件下可稳定保存24小时。
3．定量检测
3a.试管检测法（蛋白浓度检测范围：20-2000 μg/ml）
1）按上表，将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品（原液或稀释液）各100 μl
分别加到作好标记的试管中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。
2）向每个试管中各加入2 ml BCA工作液，充分混匀，37℃水浴中孵育30分钟或室
温孵育2小时。
3）将各管冷却至室温。
4）用分光光度计在562 nm处测定每个样品及BSA标准品的吸光值，同时做好记录。
5）绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
3b.微孔检测法（蛋白浓度检测范围：20-2000 μg/ml）
1）按上表，将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品（原液或稀释液）各25 μl分
别加到作好标记的96孔板微孔中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。
2）每孔加入200 μl BCA工作液，充分混匀，盖上96孔板盖，37℃孵育30分钟。
3）冷却至室温。
4）用酶标仪在540-590 nm范围内，测定每个样品及BSA标准品吸光值，做好记录。
5）绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
注意：1）BCA法测定蛋白浓度时，吸光值会随着时间的延长不断加深。因此所有样品测定需在3-5 分钟内完成，否则会影响蛋白定量的准确度。
2）建议以去除背景值后的吸光值读数绘制标准曲线。
3）由于操作误差导致标准品读数严重偏离线性曲线的应舍去。
4）未知样品浓度可以从标准曲线方程中计算得出, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。
5）如果得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。
4．BCA蛋白定量分析结果举例：
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