SDS-PAGE凝胶制备试剂盒操作步骤

SDS-PAGE Gel Kit

SDS-PAGE凝胶制备试剂盒

目录号：K0022

组分说明及保存条件

本产品所提供的APS（过硫酸铵）为固体粉末，使用前加入双蒸水溶解即配制10%APS溶液（0.5 g APS加5ml双蒸水、2.5  g APS加25ml双蒸水），将溶液分装后置于-20℃保存，通常半年内有效。溶液在使用中可放置4℃保存两周。

            本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途  

产品简介

　　本产品包括SDS-PAGE凝胶制备所需全套试剂，只需自备蒸馏水，即可制备高质量

各种浓度的变性PAGE凝胶，方便、快捷。本试剂盒在分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中

已加入10%SDS,使用时不用另外加入。

注意事项

1.  10%APS配制后分装-20度保存。APS溶液不稳定，应尽量减少室温存放时间，每

   次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用

   -20度保存的10%APS。

2.  PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及APS、TEMED的用量密切相关；在其它条件不变

   的情况下，可通过改变APS及TEMED的用量，控制PAGE凝胶的聚合速度，凝胶聚

   合过快不利于操作；附表中的 APS及TEMED量可供参考，应根据实际操作情况做

   适当的调整。

3.  在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。

4.  在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。

5.  丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。

6.  本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

操作步骤

根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，胶浓度请参考附表1。

 I 灌制分离胶（各试剂使用量请参考附表3）

1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。

注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。

2．将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯或试管中混合。

3．加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于 mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端

   1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，

   使凝胶表面保持平整。

5．静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。

 II灌制浓缩胶（各试剂使用量请参考附表2）

1．去除覆盖在分离胶上的水层。

2．将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、浓缩胶缓冲液和双蒸水在一个小烧杯或试管中混

   合。

3．加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。

5．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

6．静置10~20分钟，等待浓缩胶聚合。

7．待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。

8．进行常规电泳操作。

附表

  附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与建议分离范围         

附表2.配制5%SDS-PAGE浓缩胶

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