DH5α Competent Cell

DH5α感受态细胞

目录号：YJ0808

保存条件：-80℃保存。

组分说明

Cat. No.                                          YJ0808B

Size                                                10×100 μl         

DH5α Competent Cell                       10×100 μl           

Control DNA pUC19，0.1 ng/μl           10 μl        

产品简介

本产品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA 的热击转化。DH5α是一种常用于质粒克隆的菌株，其 φ80lacZΔM15基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现 α互补，可用于蓝白斑筛选。 recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。使用pUC19质粒检测，转化效率可达108，适用于的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。

注意事项

1. 感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在 -80℃下保存，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。

2. 转化所有步骤均在无菌条件下操作。

3. 包装中有0.1 ng/μl的pUC19DNA，供对照试验使用。

操作步骤

1．取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用。

以 下 实 验 以 50                                           μl 感 受 态 细 胞 为 例 。2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量

的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻

轻吹打混匀，冰浴30分钟。

3．42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。

4. 每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。

• 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的 SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收， 倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意：1）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心（4,000 rpm，2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。

2） 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3） 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养   基进行培养。

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