聚合酶链式反应酶联免疫吸附分析法(PCR-ELISA)

   聚合链式反应(Polymerase Chain Reaction,简称PCR),是用于放大特定的DNA片段,在生物体外复制DNA的分子生物学技术.ELISA是免疫学测定中敏感和特异的检测方法的代表.PCR-ELISA综合上述两方法,成为继PCR之后灵敏性更高,特异性更强,更省时易行的新检测方法,并且解决了PCR产物宣的问题,使得PCR在临床医学上得以应用.

   PCR产物的生成量是以指数增加的.PCR能将pg=10-⒓g量级的DNA起始待测模板扩增到微克(ug=10-⒍g)水平,能从100万个细胞中检测出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个空斑形成单位(Plaque form-ing unit,简称PFU);在细菌的检测中,即使低至1个细菌的靶DNA也能被检出.PCR是分子生物学中检测DNA普遍和灵敏的技术.PCR反应扩增出相关DNA高拷贝数,以前用荧光素(溴化乙锭,简称EB)染色凝胶电泳进行检测,但无法定量.曾有人利用荧光素染色凝胶电泳的扫描照片进行光密度分析,希望通过光密度的变化实现PCR的定量,但由于荧光素染色凝胶电泳本身的检测结果不具有特异性,因此光密度分析无法获得定量的结果,这使得长期以为,PCR只能获得相对定量的结果,无法应用在临床医学上.科技的发展是相互影响的,酶联免疫吸附分析法(ELISA)的出现启发了人们,为PCR的定量开辟了一条新的思路.在PCR扩增以后,利用ELISA的原理和方法,使用酶标抗体,通过免疫吸附,酶促反应产物的分析来实现定量,这样的新方法被称为PCR-ELISA.