样品去盐技术

在免疫酶技术中，抗原、抗体、酶及酶标记抗体（或抗原）在分离与纯化过程中，常常会碰到去盐这一实验环节。经过去盐，蛋白质溶液中不必要的无机盐分子得以去除，从而使蛋白进一步纯化与稳定。常用的去盐技术如下：

1．透析

适用于体积不太大的蛋白质溶液，简单方便，效果理想但费时。

2.凝胶过滤

适用于体积中等的蛋白质溶液，简便快速，效果理想，但去盐后的蛋白质溶液体积增大较多。

3.超滤

适用于体积较大的蛋白质溶液，去盐速度快，同时具有浓缩作用，但由于膜吸附作用，样品丢失较多。

4.透析

实验室常用的去盐方法是透析法。

在透析法中所使用的透析袋，是一种斗透膜。半透膜具有使小分子或离子透过，而蛋白质分子不能通过的特性。将蛋白质溶液装入透析袋内，浸泡于蒸馏水中，由于膜内外可扩散离子浓度的差别，使蛋白质溶液中的无机盐分子向膜外蒸馏水中扩散。如果经常更换蒸馏水，则可将蛋白质溶液中的盐类分子全部除去，这就是半透膜的去盐透析原理。假若膜外不是蒸馏水而是缓冲液，可以经过膜内外离子的相互扩散，改变蛋白质溶液的无机盐成分，这就是半透膜的平衡透析原理。在离子交换层析前经常进行平衡透析处理。

半透膜透析去盐过程如下：

• 依据样品量的多少，剪取一段半透膜，浸在蒸馏水中一段时间，然后再用蒸馏水冲洗。
• 使用时，将半透膜一端折叠，封闭使之成底端，并用滴管加入蒸馏水检查是否漏水。
• 在1000－2000ml大烧杯中注满水，烧杯口上搁置一玻棒。
• 倒尽膜内蒸馏水，然后加入蛋白质样品液（不能装得太满，以免胀裂），用橡皮筋扎牢管的上端，悬挂在玻璃棒中央，放入蒸馏水烧杯中。
• 将蒸馏水烧杯置于4℃冰箱中透析2－3天，每天换水3次以上。如果置于磁力搅拌器上搅拌透析，则去盐效果更好。要经常检查透析袋的扎口是否紧密，以防漏液。
• 按不同样品要求去除不同无机盐离子，可用特定的指示剂测定后透析用过的蒸馏水中是否还含有这种离子。

5．讨论

（1）蛋白质样品的浓度应透析后测定，因为经过半透膜透析，膜内渗透压高于膜外，水分子会进入膜内，所以在去盐以后，蛋白质溶液体积会相应增大。

（2）有时会在透析袋内发生沉淀，一般而言，通过离心去除并不影响蛋白质样品的性质。

 （3）透析袋在生理盐水中浸洗后，还可继续使用。